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293T类贴壁不牢细胞该如何操作?

2023-05-23 来源:细胞小飞侠 阅读次数:844

  293T细胞系名称中的“T”来自于将 SV40 T 抗原整合到 HEK293 基因组中——这意味着它们能够从携带 SV40 复制起点的质粒载体中产生大量蛋白质,形成高转衍生株。该细胞因比较容易转染,被广泛应用于病毒包装,也是常用的表达研究外源基因的细胞株。


    当收到复苏的常温运输细胞293T时,在显微镜下找不到细胞,可见大部分细胞脱落,肉眼可见的细胞团块,这都属于正常现象。

            293T细胞贴壁不牢聚团脱落图片


处理操作步骤:

01

  收到细胞后可静置于培养箱中稳定2~3小时后进行处理,应于当日处理,不建议放置培养箱中过夜。

02

  整瓶运输培养基全部转入无菌离心管中,可用250ml离心管离心收集细胞。

03

  原瓶贴壁细胞换新鲜的完全培养基继续在原培养。

04

  离心收集后的细胞去掉上清,加入6-7ml 完全培养基重悬并充分吹散细胞使细胞团分散,使用新的T25培养瓶,视细胞数量决定传代比例,建议初次传代比列为1:2

05

  次日观察细胞的贴壁情况,若贴壁细胞量过多,出现细胞堆积现象,可再次传代分瓶,若贴壁密度正常则继续培养。


操作时应注意:

1. 轻拿轻放

  这类细胞贴壁不牢,松散,易脱落,操作时应轻拿轻放。

2. 动作缓慢

  操作中使用PBS润洗时动作缓慢,以免不慎将细胞冲跑。

3. 聚团无碍

  细胞传代后次日有轻微聚团现象,无碍,再长长看,不要马上换液或换液太勤。