细胞培养知识小课堂—培养基篇

一、L- 谷氨酰胺（L-Glutamine）是什么？我的细胞培养需要加 L- 谷氨酰胺吗？为什么培养条件信息中没有列出？我应该加多少 L-谷氨酰胺？

L- 谷氨酰胺是几乎所有哺乳动物和昆虫细胞在培养过程中所必需的氨基酸。它是许多细胞培养基的重要组成部分，参与蛋白质的合成和核酸代谢，是细胞培养的主要能量来源。所有 ATCC 配方的经典细胞培养基都含有 L-谷氨酰胺。因此，如果一个细胞系按照 ATCC 培养条件来培养，它是已经含有 L-谷氨酰胺了。如果您购买的培养基中不含 L-谷氨酰胺，则必须在使用前将其无菌添加到培养基中。在添加更多 L-谷氨酰胺之前，一定要检查基础培养基的配方。哺乳动物细胞的 L-谷氨酰胺浓度在 0.68 mM（199 培养基）到 4 mM（Dulbecco 改良 Eagle 培养基）之间变化。

二、什么是非必需氨基酸 (NEAA)？为什么要添加到细胞培养基中？

NEAA(非必需氨基酸) 是含几种非必需氨基酸的合剂，理论上添加 NEAA 要比不加的好。所有培养基配方均含有 10 种必需氨基酸以及半胱氨酸、谷氨酰胺和酪氨酸。在一些培养基配方中加入其他非必需氨基酸-丙氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、甘氨酸、谷氨酸、脯氨酸和丝氨酸-可减少细胞的代谢负担，从而增加细胞增殖。有些培养基已经添加了非必需的氨基酸。或者，非必需氨基酸可作为无菌溶液（通常为 10 mM；100X）单独制备或 WHELAB 官网购买。

三、为什么有的客户要求培养基中不含酚红？

酚红在培养基中用作 pH 指示剂。在较低的 pH 值下，它会使培养基变黄，而在较高的 pH 值下，它会使培养基变紫。对于大多数培养基（pH7.4），呈鲜红色。不幸的是，酚红可以模仿一些类固醇激素的作用，特别是雌激素。一般研究雌激素敏感细胞，如乳腺组织，使用不含酚红的培养基。此外，当酚红包含在一些无血清制剂中时，钠钾离子的稳定状态被破坏；这种影响通过在培养基中加入血清或牛垂体激素而被中和或减轻。做流式细胞检测时经常不使用加有酚红的培养基，因为它的颜色会干扰检测。

四、为什么我们会在细胞培养基中添加丙酮酸钠？

丙酮酸钠是糖酵解过程中的一种中间有机酸代谢产物，是 Embden-Myerhoff 通路的第一个成分，可以快速很容易地进出细胞。因此，将其添加到组织培养基中为合成代谢过程提供能量来源和碳的骨架。它的加入有助于维持某些特定的细胞，有助于克隆，并且在培养基中血清浓度降低时是必要的。丙酮酸钠也有助于降低荧光光诱导的光毒性。通常添加丙酮酸钠以 1 mM 为最终浓度。丙酮酸钠 100 mM（100X）无菌溶液在 WHELAB 盈湾生物官网上买到。

五．细胞培养基中的 HEPES 缓冲液，我可以在细胞培养基中使用 HEPES 缓冲液吗？

HEPES和其他有机缓冲液可以有效地用于许多细胞系. 但是，请注意，该化合物可能是有毒的，特别是对于某些分化的细胞类型，因此应在常规使用前评估其效果。HEPES 也被证明能大大提高介质对暴露在荧光灯下引起的光毒性效应的敏感性。

六．β-巯基乙醇在细胞培养中起什么作用？

β-巯基乙醇被添加到淋巴细胞或其他细胞培养物中，因为用于培养基的 FBS 中的氨基酸半胱氨酸短缺，而存在大量的胱氨酸。一些像 T 细胞这样的细胞不能将胱氨酸运输到细胞质中，在那里它必须转化为半胱氨酸。β-巯基乙醇将胱氨酸还原为可被细胞转运的形式，然后转化为细胞生长所需的半胱氨酸。β-巯基乙醇也是一种还原剂，可以分解培养细胞产生的许多有毒代谢物，改善细胞周围的环境。

七．霍乱毒素（cholera toxin）是什么？为什么用在细胞培养基中？

霍乱毒素（cholera toxin）是一种腺苷酸环化酶激活剂。它在体外刺激正常乳腺上皮细胞的生长。在生物化学上，它与钙的运输有关。这种补充剂也被发现对来自结肠、肺、前列腺和皮肤的细胞有生长刺激作用。WHELAB 提供 100ng/ml cholera toxin.

八．开封后的培养基在冰箱放置会变紫色？

培养基保存在 4℃ 冰箱时，培养基内的二氧化碳会逸出，这就造成培养基越来越偏碱性，用此培养基培养细胞会引起细胞生长停滞或者死亡。此时可向该培养基中通入过滤的二氧化碳调整 PH.

九．液体培养基的保存方法？

冷藏！不可冷冻。解冻后 PH 发生改变、营养成分也会发生改变。基础培养基冷藏保质时间是 1 年。即用型完全培养基保质期是 3 个月。如果偶尔冻结，应当让其自然溶解并观察有无沉淀产生，如有果沉淀产生，则不可再用。

十．何时须更换培养基？

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