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血清到底要不要做热灭活?哪些细胞需要做热灭活?

2022-11-16 来源:WHELAB 阅读次数:265

关于血清的热灭活,是很多人感兴趣的话题,当然这个话题也存在许多争议。那么加到培养基中的血清是不是一定要做热灭活吗?


答案:不是必须的,具体要看做什么实验了。如果用于培养大多数的肿瘤细胞,血清一般是不需要灭活的,这样可以有效保存血清中的生长因子。但是如果用于培养一些表面具有补体受体的细胞,如内皮细胞,血清是需要灭活,一般是56℃30min


那么我要做滋养细胞培养,胎牛血清要做热灭活吗?

进口的血清一般都已灭活,国产的不一定,我们的经验还是灭活一下再用会比较安全。国外大多数实验室将血清的热灭活还是作为常规来执行,因为有两个作用,1)可以灭活补体,2)灭活血清中可能存在的支原体。当然这也是要根据实际情况而定,如果没有把握,那还是建议做一下热灭活吧!


热灭活操作方法:

血清5630分钟,即血清温度达到56度后维持30分钟。


注意事项:

1)  厂家提供的血清一般都是无菌处理过的,不需要自己再过滤灭菌。如果发现血清中有悬浮物,可将血清加入培养基中再一起过滤,千万不要直接过滤血清。

2)  血清解冻时注意逐步解冻,方法:将血清在-20℃至-70℃的低温冰箱中放入4℃的冰箱中1天,然后再移至室温,等待完全溶解。

3)  热灭活过程中需要摇匀(注意尽量减少气泡产生),使温度均匀,减少沉淀的发生。避免直接将血清从-20°C 37°C 解冻,因为温度变化太大,容易引起蛋白质聚集和沉淀。

4)  血清不要在37°C存放时间过长,否则血清会变得浑浊,血清中的有效成分会分解,影响血清质量。

5)  血清分装时,注意预留一定体积的空间后再放入低温冰箱,否则容易造成污染或者出现玻璃瓶破裂。因为血清在冷冻时体积会增加10%左右。

6)  如果需要长期保存血清,必须保存在-20-70℃的低温冰箱中。请勿存放于 4°C 的冰箱中超过 1 个月。

7)  血清的使用时一定要避免多次的反复冻融,这样会增加血清被污染的风险,出现沉淀从而严重降低血清的质量。