Q：培养液到底要不要加双抗（青霉素&链霉素）？
A：双抗不是细胞生长必需的。我们培养细胞时不常规使用抗生素，因为连续使用抗生素会促进抗生素耐药性细胞株的产生，导致轻度污染持续存在。一旦将抗生素从培养液中去除，这种轻度污染最终将发展成为大规模污染。具体情况，可根据自己实验室的环境，自行决定是否使用双抗。
Q：细胞培养，能更换成其它种类的培养基吗？
A：我们强烈建议最好使用细胞提供机构或细胞库推荐的生长培养液。有些细胞可能会适应在不同培养基中生长，在做好保种的条件下，可以分出部分细胞做测试。
Q: 细胞在培养过程中出现碎片如何处理？
A: 贴壁细胞在移除原培养液后，用 PBS 冲洗 2-3 遍；悬浮细胞离心移除原培养液后，加入 PBS 重悬，离心移除 PBS; 一般建议重复上述步骤 2-3 遍，用 800-1000rpm 离心 3-5 分钟。
Q：细胞冻存能放在 -80℃ 保存吗？
A：长期保存的细胞应当放在液氮（-196℃）中保存，短时间（一般 1 周-2 周）可以存放在 -80℃。
Q：培养瓶是用密封盖好，还是用透气盖好？
A：都可以。只是在使用密封盖培养瓶时，瓶盖旋至约 2/3，不要完全拧紧，预留约 1/3 以便细胞可以透气；有些品牌的密封盖培养瓶的瓶盖上有适合位置指示标志。
Q:何谓 FBS,FCS,CS,HS?
A: Fetal bovine serum(FBS)和 Fetal Calf Serum(FCS)之间没有区别，都是指胎牛血清；FCS 不是正规命名，尽量不使用。Calf Serum（CS）则是指小牛血清。Horse Serum(HS)则是指马血清。
Q:血清中可能出现的沉淀物是什么？
A:基于多年的实验研究，用于细胞培养的胎牛血清以及其它血清中可能会存在以下种类的沉淀物：
（1）纤维蛋白，它是经常出现的较大的沉淀物，可以达到 1-2mm，可以用肉眼观察到。因为血清都是在低温下进行收集和快速处理的，一些纤维蛋白原（可溶性的形成絮状纤维蛋白的前体）在处理过程中仍然处于溶解状态，当经过最后的过滤分装后，就会在瓶中凝结出现纤维蛋白沉淀。
（2）磷酸钙，它也是常见的一种沉淀物，通常会使血清出现浑浊，并且在 37℃ 培养的时候会增加。这种沉淀物在倒置显微镜下观察像小黑点， 这些小黑点由于布朗运动看上去可以活动，因此经常被误认为是微生物污染。
（3）胆固醇、脂肪酸酯以及一些蛋白质。他们也是血清中出现沉淀物的常见原因。
Q:血清中的沉淀物对细胞培养有什么影响？
A:（1）细胞生长，我们的试验以及经验表明沉淀物不会影响细胞培养，我们的客户以及其它血清生产商也证明了这一点。
（2）过滤，如果血清中出现大量的沉淀物，血清将很难过滤。一般说来，因为在血清生产工序中已经过 100nm 或者 40nm 的过滤处理，并且经过了严格的无菌检测，因此不推荐再过滤用于细胞培养 的血清。在实验室中没有必要再过滤处理血清，在大规模的细胞培养中往往将血清直接加到培养基中一起 过滤。
（3）污染，磷酸钙往往被误认为微生物污染而引起争端。研究者可能会在血清中观察到一些絮状的 沉淀，因此就会比较警觉的去做无菌试验，将血清放在培养箱中培养几天，结果可能会观察到更多的絮状 沉淀，因此就断定血清被污染了。并且当研究者将血清样品放在倒置显微镜下观察时往往可以看到一些可 以运动的小黑点，因此就更加确认是血清被污染了。于是，研究者就会花费更多的时间和精力来和生产商 确认，但最终确定血清没有被污染而只是沉淀。为了避免这些问题的发生，我们建议不要直接将血清放在 培养箱中培养观察是否有菌，而是将血清加到琼脂板上进行培养以观察是否有细菌生长。另外，也可以进 行革兰氏染色，在油镜下观察，以确认是否有污染。
Q:如何避免血清中沉淀物的出现？
A:首先要注意正确的血清解冻步骤，而且溶解过程中一定要每隔一段时间均匀而缓慢的摇动血清。我们已经发现在下列情况下沉淀物可能增加，使用中应该尽量避免：
（1）热灭活血清；
（2）在 37℃ 下培养血清；
（3）反复冻融；
（4）γ 射线照射；
（5）长期储存在 2-8℃；
（6）在室温下放置时间过长
Q:如何去除血清中的沉淀？
A:如想去除这些絮状沉淀物，可以将血清分装到无菌离心管中，以 400g 离心，上清液即可直接加入到培养基 内一起过滤。
注意：不要以过滤的方式去除这些絮状沉淀物，因为这可能阻塞滤膜。
